БиоМастер LR HS-ПЦР-Color (2x)
Особенности
2х реакционная смесь предназначена для амплификации длинных фрагментов ДНК от 0,2 до 30 т.п.о. с «горячим» стартом, а также для амплификации GC-богатых (>65%) и сложных участков ДНК. Смесь содержит красители, не влияющие на работу полимеразы, и компоненты,
увеличивающие плотность пробы для удобства нанесения на гель.
Описание
Набор БиоМастер LR HS-ПЦР-Color (2×) содержит 2× реакционную смесь БиоМастер LR HS-ПЦР-Color (2×), ДМСО и стерильную воду. Реакционная смесь БиоМастер LR HS-ПЦР-Color (2×) предназначена для амплификации длинных фрагментов ДНК от 0,2 до 30 т.п.о. с высокой точностью, повышенными специфичностью и продуктивностью. Данная смесь также идеально подходит для амплификации GC-богатых (>65%) и сложных участков ДНК. В состав реакционной смеси БиоМастер LR HS-ПЦР-Color (2×) входят все необходимые компоненты для проведения ПЦР (исключая ДНК-матрицу и праймеры): смесь полимераз (HS-Taq и Pfu), смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов, ПЦР-буфер, Mg2+.Смесь БиоМастер LR HS-ПЦР-Color (2×) содержит комбинацию из двух высокоочищенных ферментов: высокопроцессивной рекомбинантной HS-Taq ДНК-полимеразы и Pfu ДНК-полимеразы с корректирующей активностью. Смесь полимераз неактивна при комнатной температуре (вариант «горячего старта»). Для активации ферментов необходим прогрев реакционной смеси при 95 °С в течение 5 мин.
Сочетание полимераз позволило повысить точность и надежность амплификации в несколько раз по сравнению с Taq ДНК-полимеразой. Совместное использование двух ферментов дает возможность нарабатывать ПЦР-продукты до 30 т.п.о. Продукты, полученные с помощью БиоМастер LR HS-ПЦР-Color (2×), преимущественно содержат 3’-dA концы, что может быть использовано при клонировании.
Буфер, оптимизированный для эффективной работы обеих полимераз, обеспечивает высокий выход продукта. Повышенная вязкость и маркерные красители в составе буфера позволяют наносить реакционную смесь сразу на гель без предварительной подготовки.
Представленная форма набора для проведения ПЦР экономит время и снижает вероятность контаминации за счет малого числа шагов пипетирования. Красители, входящие в состав реакционной смеси, не мешают при очистке ампликона большинством используемых методов.
Области применения
- ПЦР для получения длинных фрагментов "long-range" ПЦР
Свойства реакционной смеси
- Смесь оптимизирована для специфичной работы Taq и Pfu ДНК-полимераз.
- Состав смеси обеспечивает возможность длительного хранения (хранение БиоМастер LR HS-ПЦР-Color (2×) в течение 7 дней при комнатной температуре не снижает эффективность ПЦР) и многократного замораживания-размораживания (более 50 раз).
- Смесь содержит красители, не влияющие на работу полимеразы, и компоненты, увеличивающие плотность пробы для удобства нанесения на гель.
Преимущества использования
- Амплификация длинных фрагментов: до 30 т.п.о. с ДНК вирусов, до 15 т.п.о. с геномной ДНК.
- Повышенная точность амплификации по сравнению с Taq ДНК-полимеразой.
- Фермент с “горячим” стартом повышает специфичность, чувствительность и выход реакции.
- Для активации смеси ДНК-полимераз требуется не более 5 мин.
- Амплификация широкого спектра ДНК- матриц.
- Упрощение стадии нанесения образцов на гель (благодаря высокой плотности смеси добавления в пробу буфера для нанесения не требуется).
- Возможность ТА клонирования продуктов ПЦР за счет дезоксирибоаденозиновых остатков, выступающих на концах амплифицированных фрагментов ДНК.