Белок-нуклеаза Cas9, 300 pmole

Особенности
Белок Cas9 - рекомбинантная эндонуклеаза Cas9 из Streptococcus pyogenes.
Применение
Геномное редактирование, технология CRISPR/Cas9.
E-5030
Кол-во, пмоль
300
6 670 ₽

Описание

Расщепление ДНК при помощи Cas9

Рисунок: схема расщепления ДНК с помощью комплекса sgRNA:Cas9-NLS.

Белок Cas9 - это рекомбинантная эндонуклеаза Cas9 из Streptococcus pyogenes, размером 158,7 кДа. Эндонуклеаза Cas9 в комплексе с направляющими РНК (дуплексом crRNA:tracrRNA) или единой sgRNA осуществляет сайт-специфический гидролиз фосфодиэфирной связи в двухцепочечной ДНК (см. рисунок). Разрыв происходит на цепи ДНК между третьим и четвертым нуклеотидами от последовательности РАМ (NGG – мотив, прилегающий к протоспейсеру). Рекомбинантная эндонуклеаза Cas9 не содержит последовательности ядерной локализации.

Источник: эндонуклеаза Cas9 очищена из штамма E.coli, содержащего плазмиду с клонированным полноразмерным геном Cas9 Streptococcus pyogenes.


Контроль качества: каждая партия фермента проходит тестирование на активность фермента, электрофоретическую чистоту, отсутствие неспецифической эндонуклеазной активности. Чистота фермента составляет ≥95% (SDS-PAGE), неспецифическая эндонуклеазная активность отсутствует.


Буфер хранения: 300 мМ NaCl, 50 мМ Tris-HCl, 0,1 мМ ЭДТА, 5 мМ 2-меркаптоэтанол, 50% глицерин (pH=7,5 при 25°C).


Стандартный буфер для проведения реакции гидролиза плазмидной ДНК: 20 мМ HEPES, 125 мМ KCl, 1 мМ ЭДТА, 1 мМ дитиотреитол, 6 мМ MgCl2, 7% глицерин (pH 7.5 при 25°C).
Оптимальная температура реакции 37°С.

Преимущества использования

  • Высокое качество фермента
  • Стоимость ниже известного зарубежного аналога
  • Оперативный срок поставки

cas9-300pmole


Маркер – смесь фрагментов ДНК с известными размерами «ДНК маркер Sky-High».

pDNA – плазмидная ДНК, двухцепочечная кольцевая молекула ДНК.

Cas9 + pDNA - плазмидная ДНК, инкубированная в присутствии белка-нуклеазы Cas9 (расщепление плазмидной ДНК не происходит).

sgRNA + pDNA - плазмидная ДНК, инкубированная в присутствии направляющей РНК (расщепление плазмидной ДНК не происходит).

Cas9 + sgRNA + pDNA - плазмидная ДНК, инкубированная в присутствии белка-нуклеазы Cas9 и направляющей РНК (плазмидная ДНК расщепляется и превращается в линейную форму).

Релаксированная форма – кольцевая форма ДНК, в которой одна цепь ДНК имеет разрыв.

Суперскрученная форма – кольцевая форма ДНК, в которой ни одна из цепей ДНК не имеет разрыва.

Линейная форма – форма ДНК, которая образуется в результате точечного разрыва обоих цепей в молекуле кольцевой ДНК.

Хранение

Хранить при температуре -20ºС. Условия инактивации фермента: инкубация 5 минут при 65°C.

Транспортировка

При температуре -20ºС.
Общая документация