Анализ экспрессии генов
Экспрессия генов — это процесс, в ходе которого наследственная информация от участка ДНК преобразуется в функциональный продукт — РНК или белок. При этом, регуляция экспрессии генов позволяет клеткам контролировать свои структурные и функциональные особенности.
1
Экспрессия генов
Несмотря на то, что конечным продуктом экспрессии генов являются белки, зачастую более простым и чувствительным методом является измерение транскрипционной активности гена на уровне мРНК. Количественная оценка может быть также проведена несколькими способами: количественная ПЦР в реальном времени (qPCR), использование микрочипов и секвенирование РНК (RNA-Seq). Наиболее доступным и распространенным подходом среди перечисленных является количественная ПЦР.
В настоящий момент анализ экспрессии используется как фундаментальных, так и в клинических исследованиях. Общая схема эксперимента выглядит следующим образом – гомогенизация биологического материала, лизис, выделение РНК, синтез кДНК и ПЦР в режиме реального времени.
2
Гомогенизация
Целью гомогенизации является разрушение тканевой структуры клеточных стенок или мембран. Обычно ткани подвергают механическому воздействию: измельчению или растиранию в ступке.
Помимо этого, также используют действие осмотического шока, многократное замораживание-оттаивание, обработку ферментами (трипсин, лизоцим, β-гиалуронидаза, липаза) и органическими растворителями (толуол, этилацетат), ультразвук или высокое давление.
Для того, чтобы обеспечить сохранность РНК, после сбора материала его помещают в специальный раствор (Рекомендуем для этого стабилизатор РНК «Биолабмикс», ST-100). Хранение различных фрагментов тканей перед гомогенизацией с использованием подобного реагента позволяет значительно улучшить качество выделенной РНК и повысить ее выход.
Для того, чтобы при работе с образцами ткани добиться наилучшего результата необходимо соблюдение некоторых правил:
-
Во-первых необходимо разрезать образец свежей, незамороженной ткани на мелкие фрагменты, толщиной не более 0.5 см. Более крупные образцы иногда впитывают реагент неравномерно, что в свою очередь может привести к деградации РНК во внутренних слоях ткани. Однако небольшие органы, например почки мышей можно хранить в реагенте целиком.
-
Во-вторых, к образцу необходимо добавить не менее 10 объёмов стабилизатора РНК, чтобы реагент полностью покрывал образец. Для того, чтобы упростить подсчеты мы рекомендуем взвесить образец перед добавлением стабилизатора. Тогда, к 1 мг ткани нужно добавить не менее 10 мкл стабилизатора. Увеличение объёма стабилизатора не ухудшает сохранность РНК.
-
Если хранение образца планируется при температуре -20 °C и ниже, то первоначально необходимо инкубировать образец при 2-8 °C в течение суток. В случае хранения при 2 °C и выше, образец сразу необходимо поместить в нужные условия.
- Для длительного хранения рекомендуется поместить образцы на – 20 °C или – 70 °C.
3
Лизис
Зачастую оказывается недостаточно только фрагментировать полученный материал для выделения из него нуклеиновых кислот. В таких случаях необходимо также лизировать крупные фрагменты клеточных стенок или мембран.
Однако задача лизис буфера не только изолировать те молекулы, которые представляют дальнейший интерес, но и обеспечить для них стабильные условия среды. Для эффективного разрушения клеток и их компонентов, рекомендуем использовать реагент «ЛИРА»/Набор «ЛИРА+» (LRP-100-2/3, LR-100, LR-200) для выделения РНК, ДНК и белков который в течение длительного времени сохраняет целостность РНК и ДНК.
В дальнейшем для выделения РНК из реагента ЛИРА можно использовать гуанидин тиоцианат-фенол-хлороформную экстракцию с осаждением или с очисткой на колонках.
Для лизиса образца из мазка/соскоба рекомендуем использовать лизис буфер из набора для выделения РНК из клеток животных/бактерий, мазка/соскоба эпителиальных клеток, вирусов на колонках.
Для лизиса образца из мазка/соскоба рекомендуем использовать лизис буфер из набора для выделения РНК из клеток животных/бактерий, мазка/соскоба эпителиальных клеток, вирусов на колонках.
Если вам необходимо лизировать одновременно большое количество образцов, для проведения скрининга рекомендуем использовать набор для экспресс-выделения ДНК Fast Lysis Buffer (FL-bio100/200). Он позволяет значительно сократить время на пробоподготовку и обеспечивает сохранение стабильности нуклеиновых кислот в течение нескольких недель.
4
Экстракция РНК
Выделение РНК является одним из важнейших этапов в анализе экспрессии генов. Итоговый результат эксперимента напрямую зависит от качества полученной РНК.
Так, например наличие в образце различных примесей, может значительно осложнить этапы обратной транскрипции и привести к ингибированию полимеразной цепной реакции.
В настоящий момент есть несколько альтернативных методов для экстракции РНК и каждый из них имеет свои особенности. Одним из самых распространённых является сорбция на модифицированный кремниевый носитель. Данный подход имеет ряд преимуществ: это высокая скорость, простота использования и высокая степень очистки.
При определенных значениях pH, которые обеспечиваются лизис буфером молекулы РНК селективно связываются с кремниевой мембраной колонки, что позволяет в значительной степени отделить их от других компонентов клетки. Если вы работаете с особо важными образцами рекомендуем использовать набор для выделения РНК из клеток животных/бактерий, мазка/соскоба эпителиальных клеток, вирусов на колонках (RUplus-10/50/250).
Выделение на магнитных частицах также основано на связывании РНК с их поверхностью. Однако в отличии от колоночных методов использование частиц позволяет проводить экстракцию без центрифуги. Для осаждения и удержания частиц достаточно использовать магнит или магнитный планшет.
Значительным преимуществом данного метода является возможность автоматизации протокола для автоматизированных станций по выделению. Для высокопроизводительного выделения или для выделения без использования центрифуги рекомендуем наборы для выделения РНК из мазка/соскоба эпителиальных клеток, вирусов на магнитных частицах (NAmagp100/1000/2000; протокол для KingFisher Flex (ThermoScientific) или Auto-Pure96 (Allsheng)).
Наиболее доступным методом выделения РНК является осаждение смеси нуклеиновых кислот. Для этого в лизис буфер добавляется соосадитель, который способствует образованию осадка РНК/ДНК после центрифугирования.
Выделенная РНК также может быть использована для ОТ-ПЦР, однако для получения ее чистой фракции после осаждения рекомендуется проводить обработку образца ДНКазой, для удаления примесей ДНК. Для реализации данного подхода рекомендуем использовать набор для выделения ДНК/РНК из мазка/соскоба эпителиальных клеток, вирусов, клеток животных и бактерий (PN-100).
Еще один подход к выделению РНК, на который стоит обратить внимание основан на фенол-хлороформной экстракции молекул. При смешивании указанных реагентов с последующим центрифугированием можно наблюдать разделение водной и органической фракций.
В случае низких значений pH в растворе, ДНК переходит в органическую фазу, РНК останется в водной фазе, а белки распределяются на границе этих двух фаз. Для осуществления фенол-хлороформной экстракции мы рекомендуем использование реагента «ЛИРА» (LR-100, LR-200, LRP-100-2, LRP-100-3).
Для более высокой степени очистки суммарной РНК и выделения фракции коротких РНК можно использовать комбинацию Фенол-хлороформного разделения фаз и колоночной очистки. Рекомендуем использование набора для выделения РНК суммарной и микроРНК из клеток и тканей (LRU-100-50).
ВАЖНО!
Для получения достоверных данных в эксперименте по анализу экспрессии генов рекомендуем после стадии выделения проверять стабильность полученной РНК.
Наиболее простым способом является анализ суммарной РНК в агарозном геле: интенсивность бэнда 28S рРНК должна быть примерно в 2 раза больше интенсивности бэнда 18S рРНК. При этом можно оценить и примесь геномной ДНК, которая может присутствовать в зависимости от выбранного протокола и набора.
Стоит отметить, что при соблюдении протокола и температуры на всех стадиях выделения – реагент Лира и набор LRU обеспечивают выделение РНК, такого уровня, что геномная ДНК не детектируется на геле при нанесении около 1 мкг.
Для анализа РНК в геле рекомендуем Буфер для нанесения образцов РНК на гель «ФриК» (D-3001).
5
Синтез кДНК и ПЦР*
После того, как молекулы РНК были выделены из целевого образца, необходимо получить комплементарную ДНК (кДНК) для последующего количественного ПЦР. В классическом представлении предполагалось, что процесс транскрипции идет только в одном направлении от ДНК к РНК.
Однако с открытием ретро-вирусов стало понятно, что и РНК может выступать в качестве матрицы для синтеза ДНК, это явление получило название Обратная транскрипция, а фермент, способный осуществить данную реакцию – Обратная транскриптаза или Ревертаза.
В анализе экспрессии генов существует два принципиальных подхода к постановке эксперимента: это проведение одностадийной обратной транскрипции, совмещенной с полимеразной цепной реакцией (ОТ-ПЦР) и двухстадийной, в которой ОТ и ПЦР проходят независимо.
Разделение ОТ и ПЦР на две фазы является оптимальным решением, если планируется проведение анализа для большого количества мишеней с использованием одного или нескольких образцов РНК, или в случае формирования коллекции образцов для длительного хранения в виде кДНК. Использование одношагового ОТ-ПЦР позволяет значительно сократить время эксперимента и подходит для анализа большого количества образцов по нескольким мишеням.
Подбирая фермент для обратной транскрипции, необходимо учитывать максимальную длину матрицы, температурный оптимум фермента, его чувствительность и наличие рнказной активности.
Для проведения реакции ОТ мы рекомендуем использование обратной транскриптазы M-MuLV –RH (R03-10/50). Фермент проявляет РНК- и ДНК-зависимую полимеразную активность, но лишен активности РНКазы Н. M-MuLV –RH проявляет оптимальную активность при 42 °С.
Для транскрипции сложных матриц мы рекомендуем использование обратной транскриптазы RNAscribe RT (R04-10/50). Фермент, благодаря высокой рабочей температуре (до 60 °C), способен использовать сложные матрицы, обеспечивая при этом специфичность. Кроме того, его высокая скорость реакции позволяет выполнять синтез всего за 15 минут.
Финальной частью анализа экспрессии генов является ПЦР в режиме реального времени. Стадия ПЦР проходит схожим образом как в одностадийной, так и в двухстадийной реакции, за исключением того, что снижение шагов пипетирования в совмещенном ОТ-ПЦР значительно сокращает время эксперимента и уменьшает риск контаминации.
Метод использует общие принципы ПЦР, однако количество амплифицированной ДНК определяется в реальном времени после каждого цикла амплификации. При этом для количественного определения используют два основных метода —интеркалирующие красители, которые встраиваются в двуцепочечные молекулы ДНК, и модифицированные олигонуклеотиды (ДНК-зонды), которые флюоресцируют после гибридизации с комплементарными участками ДНК.
Использование зондов обеспечивает более специфичный сигнал для детекции, так как он исходит непосредственно после гибридизации с целевым участком генома в ограниченном праймерами пространстве. Благодаря этому нет необходимости проводить постамплификационных анализов для того, чтобы убедиться в том, что получен целевой продукт.
Для проведения ОТ-ПЦР с интеркалирующим красителем рекомендуем использовать БиоМастер ОТ-ПЦР SYBR Blue (2×) (RM04-80/400), а для детекции с флуоресцентными зондами рекомендуем набор БиоМастер ОТ-ПЦР-РВ (2×) RM03-80
В случае если предварительно была проведена обратная транскрипция, то ПЦР также можно провести с помощью наборов: БиоМастер HS-qPCR (2×) (MH020-400/2040) и БиоМастер HS-qPCR SYBR Blue (2×) (MHC030-400) для детекции с зондами или интеркалирующим красителем.
Кроме того, для ПЦР с кДНК можно провести выравнивание по референсному красителю (ROX). В линейке продукции Биолабмикс можно найти наборы как с низким, так и с высоким содержанием ROX:
- БиоМастер HS-qPCR Hi-ROX SYBR (2×)
- БиоМастер HS-qPCR Lo-ROX SYBR (2×)
- БиоМастер HS-qPCR Hi-ROX (2×)
- БиоМастер HS-qPCR Lo-ROX (2×)
Полученные данные амплификации обрабатываются, после чего они позволяют оценить изменение уровня экспрессии генов в исследуемом биоматериале. Обычно для анализа результатов ПЦР используют «ΔΔCt» метод.
В исследовательских и диагностических лабораториях, активно использующих метод ПЦР, возникает повышенный риск ложноположительных результатов. Это может произойти из-за контаминации реакционной ПЦР-смеси ампликонами ранее выполненных ПЦР.
Один из наиболее распространенных способов борьбы с такой контаминацией заключается в частичной или полной замене в реакционных ПЦР-смесях dTTP на dUTP, которая приводит к тому, что все получающиеся ампликоны содержат урациловые основания. После чего в реакционную смесь добавляют Урацил-ДНК-гликозилазу (УДГ). Фермент катализирует высвобождение урацила из урацил-содержащих одно- или двуцепочечной ДНК, но не действует на dUTP. Образующиеся при этом нарушения в нуклеотидной последовательности (AP-сайты) блокируют работу ДНК-полимераз и способствуют расщеплению при повышенной температуре и высоких значениях pH.
Таким образом, введение в протокол амплификации этапа температурной инактивация фермента, в результате которой происходит также гидролитическое разрушение ампликонов с выщепленным урацилом, устраняет проблему контаминации, так как все ампликоны с урацилом, попавшие в реакционную смесь из предыдущих амплификаций, перестают быть матрицами для ДНК-полимераз. Для устранения контаминации в ваших экспериментах мы рекомендуем использовать наборы:
- БиоМастер UDG HS-qPCR SYBR Blue (2×)
- БиоМастер UDG HS-qPCR Hi-ROX SYBR (2×)
- БиоМастер UDG HS-qPCR Lo-ROX SYBR (2×)
- БиоМастер UDG HS-qPCR (2×)
- БиоМастер UDG HS-qPCR Hi-ROX (2×)
- БиоМастер UDG HS-qPCR Lo-ROX (2×)
На первых этапах разработки и оптимизации экспериментов ОТ-ПЦР и ПЦР необходимо проверить правильность нарабатываемого продукта – проанализировать длину продукта гель-электрофорезом. Удобным решением являются наборы и мастермиксы для классической ПЦР:
- БиоМастер HS-Taq ПЦР (2×)
- БиоМастер HS-Taq ПЦР-Color (2×)
- БиоМастер HS-Taq ПЦР-Спец (2×)
- Набор для проведения ПЦР с HS Taq (+MgCl2)
- Набор для проведения ПЦР с HS-Taq
- Расширенный набор для проведения ПЦР с HS-Taq
Наиболее быстрым и удобным для последующего анализа в геле является применение наборов серии Color (БиоМастер HS-Taq ПЦР-Color (2×)), которые сразу содержат красители для анализа ПЦР-продуктов с помощью электрофореза в геле, то есть образец не требует отдельного этапа пробоподготовки.
Для проведения анализа подвижности в геле мы разработали линейку готовых к использованию ДНК-маркеров с широким диапазоном анализа от 50 п.н. до 10 т.п.н.
- ДНК маркер Step50 plus
- ДНК маркер Step 100
- ДНК маркер Step 100 Long
- ДНК маркер Sky-High
Для упрощения процедуры гель-электрофореза мы предлагаем удобные сопутствующие буферы:
- 50х Буфер для электрофореза нуклеиновых кислот
- 4-кратный буфер для хранения и нанесения образцов ДНК «БиК»
- 6-кратный буфер нанесения и хранения образцов ДНК «ТриК»
Но! Проведение электрофореза ампликонов требует особой аккуратности, и мы рекомендуем проводить анализ электрофорезом в отдельном помещении, специально изолированном от места сборки реакционных смесей и хранения исходных наборов и реагентов.
Краткий теоретический блок:
*- Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — экспериментальный метод молекулярной биологии, способ значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой ДНК в биологическом материале. Метод основан на многократном избирательном копировании определённого участка ДНК, ограниченного специфичными праймерами (олигонуклеотидами длиной 18—30 оснований).
Таким образом амплификация происходит только случае, если целевой фрагмент присутствует в исследуемом образце. Реакция состоит из нескольких стадий денатурации, или «плавления» ДНК, когда двухцепочечная ДНК под действием высокой температуры переходит в одноцепочечное состояние; связывания (отжига) праймеров с матричной ДНК; элонгации, или удлинения цепи.
Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты: ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать, два праймера, комплементарные концам требуемого фрагмента, ДНК-полимераза, дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C, T), ионы Mg2+, необходимые для работы полимеразы и буферный раствор.
Таблица комплексного решения
Имя
Каталожный №
Количество, е.а.
Цена за шт
Кол-во
Сумма
Имя
Обратная транскриптаза RNAscribe RT
RNAscribe RT – генетически модифицированная обратная транскриптаза (ревертаза) вируса лейкемии мышей (M-MuLV).
Имя
Обратная транскриптаза M-MuLV –RH
M-MuLV –RH – генетически модифицированная обратная транскриптаза (ревертаза) вируса лейкемии мышей (M-MuLV). Фермент проявляет РНК- и ДНК-зависимую полимеразную активность, но лишен активности РНКазы Н. M-MuLV –RH проявляет оптимальную активность при 42 °С (активна до 50 °С). В набор также входит 5 × ОТ-буфер-mix, который содержит все необходимые компоненты для работы ревертазы, кроме праймеров и РНК-матрицы.
Имя
Набор для проведения ПЦР c HS-Taq (+MgCl2)
Набор для проведения ПЦР с HS-Taq (+MgCl2) содержит все реагенты, необходимые для проведения амплификации геномной ДНК, кДНК и клонируемой ДНК матриц, включая 5×ПЦР-буфер с MgCl2 и Taq ДНК-полимеразу с «горячим» стартом.
Имя
Расширенный набор для проведения ПЦР с HS-Taq
Набор содержит рекомбинантную Taq ДНК-полимеразу с "горячим" стартом, три реакционных буфера и другие необходимые компоненты для проведения ПЦР с широкого спектра матриц.
Имя
Набор для проведения ПЦР с HS-Taq
Набор содержит все реагенты, необходимые для проведения амплификации геномной ДНК, кДНК и клонируемой ДНК матриц, включая 5×ПЦР-буфер без MgCl2 и Taq ДНК-полимеразу с «горячим» стартом.
Имя
Каталожный №
Количество реакций (50 мкл)
Цена за шт
Кол-во
Сумма
Имя
БиоМастер ОТ-ПЦР–Премиум (2×)
Набор содержит 2× буфер для ОТ-ПЦР–Премиум, содержащий все необходимые компоненты (за исключением ферментов, РНК матрицы и праймеров); смесь ферментов БиоМастер-Премиум-микс, воду, обработанную ДЭПК, ДМСО и буфер для нанесения (6×).
В состав БиоМастер-Премиум-микс входит M-MuLV –RH, HS-Taq ДНК-полимераза и Pfu ДНК-полимераза в оптимальном соотношении для протекания обеих реакций.
Имя
БиоМастер HS-Taq ПЦР-Спец (2×)
Смесь оптимизирована для проведения эффективной и воспроизводимой ПЦР c “горячим” стартом на сложно-структурированных и/или GC-богатых ДНК-матрицах.
Имя
Каталожный №
Выделений
Цена за шт
Кол-во
Сумма
Имя
Набор Fast Lysis Buffer для экспресс-выделения ДНК
Минимальное количество стадий - предельно быстрый качественный результат.
Имя
Набор для выделения РНК на колонках (модифицированный)
Набор для выделения РНК из культур эукариотических клеток, культур клеток грамотрицательных и грамположительных бактерий, мазков или соскобов эпителиальных клеток, вирусов.
В процессе выделения целостность РНК сохраняется. Возможно выделение до 50 мкг РНК.
Имя
Набор для выделения ДНК/РНК методом осаждения с соосадителем
Выделение ДНК и РНК из культур клеток животных и бактерий, мазков/соскобов, вирусов методом осаждения. Буфер для лизиса содержит соосадитель ДНК/РНК.
Имя
Набор для выделения РНК суммарной и микроРНК из клеток и тканей
Выделение и очистка суммарной РНК и малых форм РНК (до 200 н.т., включая микроРНК) из культур клеток животных и бактерий, тканей животных и растений.
Имя
Набор для выделения РНК на магнитных частицах
Набор для выделения РНК из культур клеток животных и бактерий, мазков/соскобов, вирусов на магнитных частицах. Ручной и автоматический способы выделения. Auto-Pure96 (Allsheng) и KingFisher Flex (ThermoScientific).
Имя
Каталожный №
Количество реакций (25 мкл)
Цена за шт
Кол-во
Сумма
Имя
БиоМастер ОТ-ПЦР SYBR Blue (2×)
Набор предназначен для проведения обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ОТ-ПЦР РВ) одношаговым методом.
Имя
БиоМастер ОТ-ПЦР-РВ (2×)
Набор предназначен для проведения обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ОТ-ПЦР РВ) с флуоресцентными зондами одношаговым методом.
Имя
БиоМастер HS-qPCR Lo-ROX SYBR (2×)
2х реакционная смесь, содержащая Taq ДНК-полимеразу с «горячим» стартом, для проведения ПЦР в режиме реального времени с SYBR Green I. Содержит ROX в низкой концентрации для работы на соответствующих приборах.
Имя
БиоМастер UDG HS-qPCR Lo-ROX SYBR (2×)
2х реакционная смесь, содержащая Taq ДНК-полимеразу с «горячим» стартом, dUTP и N-урацил-ДНК-гликозилазу, для проведения ПЦР в режиме реального времени с SYBR Green I. Содержит ROX в низкой концентрации для работы на соответствующих приборах.
Имя
БиоМастер HS-qPCR Hi-ROX (2×)
2х реакционная смесь, содержащая Taq ДНК-полимеразу с «горячим» стартом, для проведения ПЦР в режиме реального времени с флуоресцентными зондами. Содержит ROX в высокой концентрации для работы на соответствующих приборах .
Имя
БиоМастер HS-qPCR Lo-ROX (2×)
2х реакционная смесь, содержащая Taq ДНК-полимеразу с «горячим» стартом, для проведения ПЦР в режиме реального времени с флуоресцентными зондами. Содержит ROX в низкой концентрации для работы на соответствующих приборах.
Имя
БиоМастер UDG HS-qPCR (2×)
2х реакционная смесь, содержащая Taq ДНК-полимеразу с «горячим» стартом, dUTP и N-урацил-ДНК-гликозилазу, для проведения ПЦР в режиме реального времени с флуоресцентными зондами.
Имя
БиоМастер UDG HS-qPCR Hi-ROX (2×)
2х реакционная смесь, содержащая Taq ДНК-полимеразу с «горячим» стартом, dUTP и N-урацил-ДНК-гликозилазу, для проведения ПЦР в режиме реального времени с флуоресцентными зондами. Содержит ROX в высокой концентрации для работы на соответствующих приборах .
Имя
БиоМастер UDG HS-qPCR Lo-ROX (2×)
2х реакционная смесь, содержащая Taq ДНК-полимеразу с «горячим» стартом, dUTP и N-урацил-ДНК-гликозилазу, для проведения ПЦР в режиме реального времени с флуоресцентными зондами. Содержит ROX в низкой концентрации для работы на соответствующих приборах.
Имя
БиоМастер HS-qPCR Hi-ROX SYBR (2×)
2х реакционная смесь, содержащая Taq ДНК-полимеразу с «горячим» стартом, для проведения ПЦР в режиме реального времени с SYBR Green I. Содержит ROX в высокой концентрации для работы на соответствующих приборах.
Имя
БиоМастер UDG HS-qPCR SYBR Blue (2×)
2х реакционная смесь, содержащая Taq ДНК-полимеразу с «горячим» стартом, dUTP и N-урацил-ДНК-гликозилазу, для проведения ПЦР в режиме реального времени с SYBR Green I.
Имя
БиоМастер UDG HS-qPCR Hi-ROX SYBR (2×)
2х реакционная смесь, содержащая Taq ДНК-полимеразу с «горячим» стартом, dUTP и N-урацил-ДНК-гликозилазу, для проведения ПЦР в режиме реального времени с SYBR Green I. Содержит ROX в высокой концентрации для работы на соответствующих приборах.
Имя
Каталожный №
Количество реакций (20 мкл)
Цена за шт
Кол-во
Сумма
Имя
Набор реактивов ОТ-M-MuLV-RH с праймерами
Набор реактивов для синтеза первой цепи кДНК с широкого спектра РНК-матриц.
Имя
Каталожный №
Количество мл
Цена за шт
Кол-во
Сумма
Имя
Реагент «ЛИРА»/Набор «ЛИРА+» для выделения РНК, ДНК и белков
Реагент "Лира" предназначен для фенол-хлороформной экстракции РНК, ДНК и белков. Аналог TRIzol reagent.
Имя
Стабилизатор РНК
Регент сохраняет целостность РНК и ДНК в образцах культуральных клеток животных и бактерий, тканях животных и растений.
Имя
Буфер для нанесения образцов РНК на гель «ФриК»
Содержит формамид и бромистый этидий для эффективной денатурации и окрашивания РНК. Содержит два красителя для оценки подвижности в геле: бромфеноловый синий и ксиленцианол FF.
Имя
Каталожный №
Количество (мкг)
Цена за шт
Кол-во
Сумма
Имя
ДНК маркер Step50 plus
ДНК маркер Step 50 plus (13 фрагментов: от 50 до 1500 п.н. с шагом в 50 п.н. от 50 до 400 п.н.), 50 мкг в 500 мкл (0,1 мг/мл), готовый к нанесению.
Имя
ДНК маркер Step 100
ДНК маркер Step 100 (10 фрагментов: 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 и 1000 п.н.), 50 мкг в 500 мкл (0,1 мг/мл), готовый к нанесению.
Имя
ДНК маркер Step 100 Long
ДНК маркер Step 100 Long (14 фрагментов: 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1200, 1500, 2000 и 3000 п.н.), 50 мкг в 500 мкл (0,1 мг/мл), готовый к нанесению.