Синтез мРНК
мРНК становятся удобным и очень эффективным средством доставки генетической информации в клетки. Разработка мРНК-вакцин и мРНК-терапии является одной из самых приоритетных задач в лабораториях всего мира!
С помощью синтезированных мРНК можно решить множество научных задач: экспрессия репортерных белков, доставка систем геномного редактирования, временная экспрессия гена-мишени, оценка эффективности новых систем доставки.
С помощью синтезированных мРНК можно решить множество научных задач: экспрессия репортерных белков, доставка систем геномного редактирования, временная экспрессия гена-мишени, оценка эффективности новых систем доставки.
1
Введение
Транскрипция in vitro — это процесс получения молекул РНК на матрице ДНК за пределами живой клетки «в пробирке». Использование данного метода позволяет создавать специфические последовательности РНК для различных целей, таких как изучение экспрессии генов и получение РНК для функциональных или структурных исследований. С помощью проведения транскрипции in vitro можно нарабатывать различные виды РНК, включая короткие регуляторные и направляющие РНК для систем геномного редактирования. В настоящий момент наблюдается особый интерес к получению искусственных матричных РНК (мРНК), с помощью которых можно решить множество научных задач: экспрессия репортерных белков, доставка систем геномного редактирования, временная экспрессия гена-мишени, оценка эффективности новых систем доставки.
Кроме того, технология in vitro транскрипции открывает широкие возможности для современной биофармацевтики и позволяет достаточно быстро получить обширный список мРНК для профилактики и терапии различных заболеваний.
Для обеспечения наработки функциональной молекулы мРНК необходимо учитывать целый ряд ее структурно-функциональных особенностей (Рис.1). Ключевая задача при синтезе – создать молекулу мРНК, структура которой будет имитировать ее созревание внутри клеток. С 5’-конца в эукариотических мРНК находится КЭП – особый модифицированный нуклеотид, обеспечивающий защиту транскрипта от деградации под действием экзонуклеаз. С 3’-конца молекулу защищает длинная цепь из остатков аденозинмонофосфата (поли(А)-хвост). 5'-кэп и полиА-хвост обеспечивают успешную посадку рибосомы для эффективной инициации трансляции с матрицы мРНК. Кодирующая область мРНК обычно с двух сторон фланкирована структурированными нетранслируемыми регионами, которые регулируют трансляционную активность и стабильность мРНК. Кроме того, особую роль в обеспечении длительной функциональной активности и стабильности мРНК выполняют различные модифицированные нуклеотиды, которые формируются специальными ферментами в кодирующей и в нетранслируемых областях молекулы. Наиболее полную картину модификаций в мРНК и длинных некодирующих РНК можно изучить по результатам исследований, собранных в базах данных, например, RMBase v3.0, так как этому направлению даже дали отдельное название «эпитранскриптомика». Хотя роль отдельных модификаций вызывает по-прежнему живой научный интерес и пока до конца не изучена, ученые уже придумали, как использовать такие модификации для улучшения свойств искусственных РНК.
Рис.1 Структура мРНК
2
Подготовка к проведению синтеза мРНК
Конечно, в самом начале нужно сказать, что работа с РНК требует особой аккуратности: нужно обязательно использовать перчатки и халаты, проводить эксперименты в специально отведенных «чистых» местах, так как любые загрязнения и сами операторы работы являются активным источником нуклеаз, которые быстро разрушают РНК. В комнате, в которой планируется синтез РНК нельзя работать с препаратами РНКаз, даже в низких концентрациях! Все растворы для работы с РНК должны быть приготовлены на воде, обработанной DEPC. Мы рекомендуем использовать для растворения и разбавления растворов РНК специально подготовленную воду SP010-05, которую можно найти в разделе «Отдельные компоненты для ПЦР»
Рис. 2 Подготовка ДНК-матрицы для синтеза мРНК
Синтез мРНК начинается с подготовки матрицы для транскрипции. Обычно, в качестве ДНК-матрицы выступает линеаризованная плазмида или фрагмент ДНК, полученный методом ПЦР, который содержит целевой ген или иную заданную последовательность (Рис.2). Для создания заданных конструкций рекомендуем использование Фьюжн ДНК-полимеразы и Т4-ДНК-лигазы от компании «Биолабмикс» (E-2050). Для выделения и очистки плазмидной ДНК рекомендуем использование набора от компании «Биолабмикс» (Plasmid-250-mini или Plasmid-20-maxi). Важным преимуществом этих наборов является наличие протокола дополнительной очистки и концентрирования, которые важны для последующих стадий in vitro транскрипции. В случае использования плазмиды в качестве матрицы, ДНК должна быть линеаризована по сайту, который ограничивает длину матрицы и обеспечивает остановку полимеразы в нужном положении. Кроме того, рекомендуем очищать ДНК–матрицу перед постановкой реакции транскрипции с использованием набора DR.
Если в качестве матрицы планируете использовать ПЦР-фрагмент, то ПЦР с целевого участка геномной, вирусной или плазмидной ДНК рекомендуем проводить только с использованием высокоточной полимеразы. Это необходимо для того, чтобы предотвратить возникновение нуклеотидных замен в матрице, которые могут привести к нарушению функциональной активности синтезированной мРНК. Для получения длинных продуктов ПЦР нужно использовать высокоточную Фьюжн 2.0. ДНК-полимеразу. Если необходимо подобрать условия амплификации, то удобнее будет использовать набор для проведения ПЦР с Фьюжн ДНК-полимеразой (KH041-500).
Важно!
В процессе подготовки матрицы также необходимо учитывать несколько важных аспектов. Во-первых, она должна содержать промоторную последовательность, распознаваемую РНК-полимеразой. Например, в случае использования ДНК-зависимой РНК-полимеразы Т7 от компании «Биолабмикс» (E-1010), матрица, соответственно, должна содержать T7 промотор. Во-вторых, необходимо корректировать последовательность следующую за промотором в зависимости от варианта аналога кэпа, используемого в эксперименте.
Рис. 3 Схематичное изображение ДНК-матрицы для in vitro транскрипции
В настоящий момент в каталоге компании «Биолабмикс» представлено три варианта:
Аналог кэпа m6AG (M6AG-0050) или m7(3’OMeG)(5’)ppp(‘5)m6(2’OMeA)pG - требуемая последовательность за промотором начинается с нуклеотидов- AG подробная инструкция представлена в описании готовых наборов для синтеза cap1-кэпированных мРНК www.biolabmix.ru/catalog/rna-transcription-mrna/transcription-kits/).
Аналог кэпа m7GmAmG (AGME-0050) или m7(3’OMeG)ppp(2’OMeA)pG – требуемая последовательность за промотором начинается с нуклеотидов AG (подробная инструкция представлена в описании готовых наборов для синтеза cap1-кэпированных мРНК www.biolabmix.ru/catalog/rna-transcription-mrna/transcription-kits/).
Для более хорошо известного аналога кэпа ARCA (ARCA-0050) – требуемая последовательность за промотором начинается с гуанозина, иными словами, первое основание, включаемое в РНК: G; следующие NN: оптимально CG (подробная инструкция представлена в описании готовых наборов для синтеза ARCA-кэпированных мРНК www.biolabmix.ru/catalog/rna-transcription-mrna/transcription-kits/).
Все три кэпа сконструированы таким образом, чтобы предотвращать возможную встройку в противоположной ориентации, однако m7G и m6AG имеют дополнительные преимущества за счет дополнительной метильной группы. Они являются аналогами природных Кэп 1, которые обладают повышенной эффективность по сравнению с полученными мРНК Cap 0. В основном это обеспечивается, за счет более высокой трансляционной активности cap1-кэпированной мРНК в клетках млекопитающих и человека. Кроме того, добавление метильной группы в положение 6 первого аденозина (m6A) может дополнительно увеличить экспрессию белка по сравнению с m7G. Также считается, что модификация m6A, прилегающая к кэпу 7-метилгуанозина, может положительно влиять на стабильность мРНК, предотвращая ферментативно-опосредованное декэпирование.
3
Модифицированные нуклеотиды
Благодаря работам Нобелевских лауреатов Каталин Карико и Дрю Вайсмана, а также ряда других исследовательских групп в настоящее время хорошо известно, что модифицированные нуклеотиды значительно улучшают свойства искусственных РНК: снижают цитотоксическую активность и подавляют активацию неспецифического иммунного ответа. В клетках млекопитающих экспрессируется целый ряд РНК-рецепторов, которые настроены на детекцию чужеродной РНК. Эти механизмы были созданы и отобраны эволюционно для защиты от заражения вирусами, несущими свой генетический материал в виде РНК. Так, на появление не модифицированной и некэпированной РНК в клетках реагируют Toll-like рецепторы, RIG-I, PKR, белки семейства IFIT. Связывание этих белков с РНК запускает каскады клеточного врожденного иммунного ответа и процессы, направленные на деградацию РНК и остановку трансляции в клетках. На уровне организма появление немодифицированных РНК приводит к выработке цитокинов и воспалительным процессам, которые становятся токсичными. В цикле работ, первые из которых были опубликованы еще в 2005 году, было показано, что включение в состав искусственных РНК модифицированных нуклеотидов, таких как псевдоуридин (Ψ), 5-метилцитидин (m5C), N1-метил-псевдоуридин (m1Ψ) и N6-метиладенозин (m6A), позволяет «обмануть» РНК-рецепторы и предотвратить активацию нежелательных процессов. Сейчас уже описаны подробные молекулярные механизмы, демонстрирующие, что одни модифицированные нуклеотиды препятствуют связыванию РНК с РНК-рецепторами, другие нарушают, конформационные перестройки РНК-белковых комплексов, которые необходимы для передачи сигнала от РНК-рецептора далее на эффекторные молекулы (Рис.4).Стоит отметить, что стратегию с включением модифицированных природных нуклеотидов используют не только для синтеза мРНК, но и для получения других функциональных РНК, например, коротких регуляторных и РНК для систем CRISPR/Cas.
Рис. 4 Молекулярные механизмы, демонстрирующие вовлеченность модифицированных нуклеотидов в процесс предотвращения активация иммунного ответа
Портфолио для синтеза РНК компании Биолабмикс содержит весь перечень необходимых модифицированных NTPs для получения функциональных мРНК (Рис.5).
Рис 5. Модифицированные нуклеотиды: (1) N6-метиладенозин-5`-трифосфат (TNA-0050, Биолабмикс); (2) 5-метилцитидин-5'-трифосфат (TMC-0050, Биолабмикс); (3) Псевдоуридин-5'-трифосфат (TPU-0050, Биолабмикс); (4) N1-метил-псевдоуридин-5`-трифосфат (TNP-0050, Биолабмикс); (5) 5-метоксиуридин-5’-трифосфат
Особое внимание заслуживает 5-метоксиуридин (Рис. 5 (4), который подобно N1-метилпсевдуридину и псевдоуридину становится одим из наиболее распространенных модифицированных нуклеотидов, направленных на повышение активности синтетической мРНК и снижение неспецифичного иммунного ответа. Что подтверждается значительным улучшением экспрессии усиленного зеленого флуоресцентного белка (eGFP) в различных клеточных линиях, среди которых мРНК eGFP, модифицированная именно 5-метоксиуридином, более стабильна, чем мРНК eGFP с другими модификациями. Кроме того, считается, что замена UTP на 5-метокси-UTP в мРНК Cas9 снижает врожденные иммунные реакции, что позволяет использовать Cas9 для более широкого спектра задач как in vitro, так и in vivo.
4
Транскрипция in vitro
Основой синтеза целевой молекулы мРНК является реакция транскрипции in vitro. Для ее проведения необходимо собрать все необходимые компоненты: матрицу, РНК-полимеразу (Т7) (E-1010), смесь рибонуклеозидтрифосфатов (rNS-410) (Рис. 6). После чего полученную смесь необходимо инкубировать при температуре 37°C
Рис. 6. In Vitro транскрипция и очистка
Для обеспечения стабильности РНК в растворе, в реакцию может быть добавлен ингибитор РНКаз. Рекомендуем использовать ингибитор РНКаз от компании «Биолабмикс» (RI-0020)
В зависимости от последовательности и конечного применения синтезируемой мРНК индивидуальная оптимизация отдельных этапов протокола может улучшить как выход реакции, так и биологическую функцию мРНК. Из литературы хорошо известно, что в состав мРНК можно включить модифицированные нуклеотиды, такие как N1-метил-псевдоуридин (m1Ψ), 5-метилцитидин (m5C), псевдоуридин (Ψ) и N6-метиладенозин (m6A) в разных соотношениях.
К вариабельным параметрам реакции можно отнести изменение времени инкубации или изменение количества ДНК–матрицы. Кроме того, при работе с короткими ДНК–матрицами (< 0.5 т.п.н.) рекомендуется увеличить время инкубации до 4-х часов. Можно инкубировать реакцию при 37°С в течение 16-18 часов (ночь).
Для достижения наилучшего результата рекомендуем использование наборов от компании «Биолабмикс», в которых уже собраны все необходимые компоненты, а также подобраны оптимальные условия для проведения реакции:
Набор для синтеза мРНК in vitro (с ΨTP и m5CTP с m7GmAmG) (AG-mRNA-YC-20)
Набор для синтеза мРНК in vitro (с ΨTP и m5CTP с ARCA) (ARCA-mRNA-YC-20)
Набор для синтеза мРНК in vitro (с кэпом m7GmAmG) (AG-mRNA- 20)
Набор для синтеза мРНК in vitro (с ARCA) (ARCA-mRNA-20)
5
Очистка мРНК
Очистку синтезированной мРНК можно проводить различными способами: LiCl, фенол-хлороформной экстракции, высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), а также с использованием методов, основанных на спин-колонках. При работе с малыми объемами наиболее удобный и быстрый подход основан на использовании специальных сорбционных колонок. Рекомендуем для рутинных задач использовать набор для очистки из реакционных смесей от компании «Биолабмикс» (DR-250). В случае синтеза коротких РНК рекомендуем использование набора для выделения суммарной и микроРНК из клеток и тканей (LRU-100-50). Если же необходимо провести очистку большого количества мРНК (>1мг), то технологичнее использовать хроматографию.
Для предотвращения аккумуляции пирофосфата и для повышения выхода РНК в ходе in vitro транскрипции используют фермент неорганическую пирофосфотазу ( E-13002).
Для удаления примеси ДНК из раствора синтезированной мРНК, необходимо к реакционной смеси добавлять фермент ДНКазу. При этом, обработку ДНКазой можно проводить прямо в транскрипционном буфере непосредственно после реакции. Для достижения наилучших результатов рекомендуем использование термолабильной ДНКазы от компании «Биолабмикс» (EM-100). Термолабильные ДНКазы позволяют проводить инактивацию с помощью нагревания и короткой инкубации при повышенной температуре 55-65°С. Однако, при нагревании нарушается стабильность синтезированных РНК, поэтому мы рекомендуем избегать стадии нагревания и проводить удаление фермента ДНКазы с помощью методов сорбции (например, с использованием наборов DR или RUplus) или ВЭЖХ. Кроме того, рекомендуем проводить этап удаления фосфатов на 5’-конце, так как некэпированные молекулы РНК с остатками фосфатов являются активными индукторами неспецифического иммунного ответа и способствуют активации процессов деградации РНК в клетках за счет связывания с рядом РНК-рецепторов в клетках. Для этого лучше использовать термолабильную щелочную фосфатазу (E-12005).
Проверить качество полученной РНК можно с помощью гель-электрофореза в агарозном геле или с помощью анализа на микрочипах для капиллярного фореза. Для анализа в агарозном геле рекомендуем наносить РНК в Буфере для нанесения на гель «ФриК» (D-3001, Биолабмикс). Количество очищенной мРНК можно оценить с помощью УФ-спектрометрии. Характерный максимум поглощения для РНК: при λ = 260 нм. Для оценки концентрации РНК (мкг/мл) применяется следующая формула: A260 × разбавление × 40 мкг/мл. Характерные соотношения оптической плотности достаточно чистой РНК: A260/A280 ≥ 1.8-2.0, A260/230 ≥ 1.9. Кроме того, рекомендуем использование флуоресцентных методов оценки мРНК, реализованных в приборах Qubit или аналогичных, так как очищенная РНК может содержать примесь невключившихся трифосфатов и фрагментов ДНК-матрицы.
6
Полиаденилирование
Полиаденилирование - важнейший процесс синтеза мРНК, который заключается в присоединении к 3' концу молекулы мРНК последовательности адениновых нуклеотидов, в результате чего формируется так называемый поли(А)-хвост. Эта пост-транскрипционная модификация играет несколько важнейших ролей в созревании и стабильности мРНК. В составе пре-мРНК имеется определенная последовательность нуклеотидов, называемая сигналом полиаденилирования или поли(А) сигналом. У человека эта последовательность обычно имеет вид AAUAAA.
ПолиА-хвост при получении искусственных мРНК можно добавить в виде кодирующей последовательности в составе исходной плазмиды или ПЦР-продукта, а также используя специальный фермент полиА-полимеразу. Ферментативно удается получить максимальную длину полиА, однако такой подход менее технологичен и его сложно масштабировать. Поэтому вариант полиаденилирования нужно подбирать в зависимости от финальной задачи. В каталоге компании Биолабмикс в ближайшее время появится фермент полиА-полимераза, который отлично подходит для решения научных задач по разработке мРНК-вакцин и мРНК-регуляторов.
Kariko K. et al., Immunity, 23, 165-175 (2005).
Karikó K et al., Mol. Ther. 16(11):1833–1840 (2008).
Anderson B.R. et al., NAR, 38 (2010).
Warren L. et al.., Cell Stem Cell, 7, 618-630 (2010).
Karikó K et al., Mol Ther 20(5):948–953 (2012).
Durbin A. F. et al., mBio, 7 (2016)
Stepanov G.A., Zhuravlev E.S. et al. Genes, (2018).
Prokhorova D.V. et al., The CRISPR Journal, 5 (2022).
Hoy A. et al., The CRISPR Journal, 5 (2022).
Таблица комплексного решения
Имя
Каталожный №
Выделений
Цена за шт
Кол-во
Сумма
Имя
Набор для выделения РНК на колонках (модифицированный)
Набор для выделения РНК из культур эукариотических клеток, культур клеток грамотрицательных и грамположительных бактерий, мазков или соскобов эпителиальных клеток, вирусов.
В процессе выделения целостность РНК сохраняется. Возможно выделение до 50 мкг РНК.
Имя
Набор для выделения РНК суммарной и микроРНК из клеток и тканей
Выделение и очистка суммарной РНК и малых форм РНК (до 200 н.т., включая микроРНК) из культур клеток животных и бактерий, тканей животных и растений.
Имя
Набор mini для выделения ДНК и РНК из реакционных смесей
Набор предназначен для очистки ДНК и РНК (от 50 до 10000 н.т.) от компонентов реакции, например, от dNTP, ферментов, не
включившихся низкомолекулярных радиоактивных и флуоресцентных меток и др. на микроцентрифужных колонках.
Имя
Набор Mini для выделения плазмидной ДНК из бактериальных клеток
Выделение плазмидной ДНК из культур клеток E.coli на микроцентрифужных колонках.
Имя
Набор Maxi для выделения плазмидной ДНК из бактериальных клеток
Набор предназначен для выделения и очистки плазмидной ДНК из культур бактериальных клеток E. coli колоночным методом.
Имя
Каталожный №
Количество мкл
Цена за шт
Кол-во
Сумма
Имя
Набор 100 мМ растворов ATP, GTP, CTP, UTP (rNS-1** в воде, rNS-4** в TE буфере)
Набор из 4х пробирок, содержащих по отдельности стерильные 100 мМ растворы ATP, GTP, CTP и UTP в виде аммонийных солей в воде (rNS-101, rNS-110) или в ТЕ буфере (rNS-401, rNS-410). Чистота каждого из нуклеодидов ≥ 98% (HPLC).
Имя
Аналог кэпа m6AG
Стерильный 100 мМ раствор аналога кэпа m6AG - m7(3’OMeG)(5’)ppp(‘5)m6(2’OMeA)pG в виде аммонийной соли в воде. Чистота нуклеотида по данным ВЭЖХ не менее 96%.
Имя
5-метоксиуридин-5’-трифосфат
Продукт представляет собой стерильный 100 мМ раствор 5-метоксиуридин-5’-трифосфата в виде аммонийной соли в воде. Продукт протестирован на присутствие эндо- и экзонуклеазной активности и свободен от примесей ДНКаз и РНКаз. Чистота нуклеотида по данным ВЭЖХ не менее 96%. Функциональная активность подтверждена in vitro в реакции транскрипции.
Имя
Набор для проведения ПЦР с Фьюжн ДНК-полимеразой
Набор реагентов для постановки ПЦР с высокоточной Фьюжн ДНК-полимеразой. В набор входят отдельные компоненты такие как ионы магния, смесь дезоксинуклеотидтрифосфатов (dNTP) и диметилсульфоксид.
Имя
N6-метиладенозин-5`-трифосфат
Представляет собой модифицированный аналог аденозина и обнаружен как минорный мономер в природных РНК. N6-метиладенозин-5'-трифосфат является субстратом для РНК-полимеразы и находит применение для получения мРНК для снижения цитотоксического и неспецифического иммуностимулирующего действия, придания свойств «природных» мРНК и повышения стабильности искусственных мРНК внутри клеток млекопитающих. 100 мМ раствор аммонийной соли в воде, чистота ≥ 96% (ВЭЖХ).
Имя
Аналог кэпа m7GmAmG
Стерильный 100 мМ раствор аналога кэпа m7G(3`OMe)pppA(2`OMe)pG в виде аммонийной соли в воде. Аналог CleanCap AG (3' OMe)
Имя
5-метилцитидин-5`-трифосфат
Представляет собой модифицированный нуклеозидтрифосфат, используется для придания желаемых характеристик мРНК, таких как повышенная устойчивость к действию нуклеаз, повышенная эффективность внутриклеточной трансляции или снижение цитотоксичного и неспецифичного иммуностимулирующего действия (за счет нарушения взаимодействия искусственной РНК с рецепторами врожденного иммунитета). 100 мМ раствор аммонийной соли в воде, чистота ≥ 96% (ВЭЖХ).
Имя
Псевдоуридин-5`-трифосфат
Псевдоуридин-5'-трифосфат (pseudouridine-5'-Triphosphate, ΨTP) используют для придания желаемых характеристик искусственных мРНК: устойчивость к действию нуклеаз, повышенная эффективность внутриклеточной трансляции, снижение цитотоксического и неспецифичного иммуностимулирующего действия за счет нарушения взаимодействия РНК с рецепторами врожденного иммунитета. 100 мМ раствор триэтиламмонийной соли в воде, чистота ≥ 96% (ВЭЖХ).
Имя
N1-метил-псевдоуридин-5`-трифосфат
Модифицированный трифосфат для включения в искусственные матричные РНК (мРНК) с использованием транскрипции in vitro. Включение N1-метилпсевдоуридина снижает иммуногенность полученной мРНК. Является самой «эффективной» модификацией в технологии мРНК-вакцин и мРНК-терапии. 100 мМ раствор триэтиламмонийной (либо аммонийной) соли в воде, чистота ≥ 96% (ВЭЖХ).
Имя
Аналог структуры кэпа ARCA
Стерильный 100 мМ раствор аналога структуры кэпа ARCA в виде аммонийной соли в воде. Чистота нуклеотида ≥ 96% (HPLC).
Имя
Каталожный №
Количество реакций (50 мкл)
Цена за шт
Кол-во
Сумма
Имя
Набор для синтеза мРНК in vitro
Набор для синтеза мРНК in vitro предназначен для постановки реакции транскрипции in vitro для получения мРНК. Полученная в результате транскрипции мРНК может быть использована для изучения функций мРНК, для микроинъекций, для трансфекции клеток, для трансляции in vitro и др.
Имя
Набор для проведения T7-транскрипции in vitro
Принцип действия набора основан на ферментативном синтезе молекул РНК на ДНК-матрице при помощи ДНК-зависимой РНК-полимеразы бактериофага T7. В состав набора входят все необходимые реагенты для получения высокого выхода РНК-транскриптов за минимальное время реакции.
Полученная РНК может быть использована для изучения структуры и функций РНК, для систем геномного редактирования в качестве направляющей РНК, для исследования механизмов РНК-интерференции, для трансфекции клеток, для трансляции in vitro и др.
Имя
Каталожный №
Количество, е.а.
Цена за шт
Кол-во
Сумма
Имя
ДНК-зависимая РНК-полимераза Т7
Высокопроцессивная ДНК-зависимая РНК-полимераза из бактериофага Т7 (T7 РНК-полимераза, РНК-полимераза фага T7), специфично взаимодействующая с Т7-промотором и катализирующая синтез фрагментов РНК в направлении 5`->3` на ДНК-матрице.
Имя
Ингибитор РНКаз
Ингибитор РНКаз представляет собой рекомбинантный белок массой 50 кДа, экспрессируемый в E.coli. Он ингибирует рибонуклеазную активность эукариотических ферментов, таких как РНКаза A, РНКаза B, РНКаза C, и защищает РНК от неспецифического гидролиза.
Ингибитор РНКаз предназначен для использования в приложениях, где присутствие РНКаз может снизить качество результатов экспериментов, например при выделении РНК, синтезе кДНК, ОТ-ПЦР, транскрипции и трансляции in vitro.
Имя
Каталожный №
Количество мл
Цена за шт
Кол-во
Сумма
Имя
Стерильная вода
Стерильная вода, обработанная диэтилпирокарбонатом (ДЭПК), свободная от РНКаз и ДНКаз, с удельным сопротивлением 16-18 МОм*см, предназначена для работы c нуклеиновыми кислотами.
Имя
Буфер для нанесения образцов РНК на гель «ФриК»
Содержит формамид и бромистый этидий для эффективной денатурации и окрашивания РНК. Содержит два красителя для оценки подвижности в геле: бромфеноловый синий и ксиленцианол FF.