Описание
Bst ДНК-полимераза, большой фрагмент, - единый полипептид с молекулярным весом около 67 кДа. Полимераза высокопроцессивна. Bst ДНК полимераза катализирует синтез ДНК в направлении 5’-3’. Фермент не обладает 5'-3' и 3'-5' экзонуклеазной активностью, но обладает 5'-3' вытесняющей активностью. Bst ДНК-полимераза очищена из штамма E.coli, содержащего плазмиду с клонированным полноразмерным геном большого фрагмента ДНК-полимеразы I Bacillus stearothermophilus. Фермент содержит бактериальную ДНК.
Одна единица активности - количество фермента, необходимое для включения 10 нмолей dNTP в кислотонерастворимую фракцию ДНК за 30 мин при 65oС, рН 8,8.
Контроль качества. Каждая партия фермента тестируется на отсутствие эндонуклеазной и неспецифической экзонуклеазной активности, чувствительность фермента.
Свойства реакционной смеси
Типичный протокол LAMP:
Компонент
|
Финальная концентрация
|
10X Буфер для Bst
|
1X (не содержит MgSO4)
|
MgSO4 (100 mM)
|
8 mM
|
dNTP Mix (10 mM)
|
1.4 mM каждого
|
FIP/BIP Primers (10X)
|
1.6 µM
|
F3/B3 Primers (10X)
|
0.2 µM
|
LoopF/B Primers (10X)
|
0.8 µM
|
Bst ДНК полимераза (16,000 U/ml)
|
80-320 U/ml
|
Образец ДНК
|
> 10 копий на реакцию
|
Вода, свободная от нуклеаз
|
до 25 µl
|
Общий объем реакционной смеси
|
25 µl
|
Преимущества использования
Bst ДНК полимераза более устойчива к ингибиторам, обладает более высокой специфической активностью и процессивностью, чем Taq ДНК полимераза.
Хранение
-20°C в 10 mM Tris-HCl (pH 8.0 при 25°С), 10 mM KCl, 1% BSA, 0,02% Tween 20, 50% glycerol.
Транспортировка