Bst ДНК полимераза, большой фрагмент
Описание
Bst ДНК-полимераза, большой фрагмент, - единый полипептид с молекулярным весом около 67 кДа. Полимераза высокопроцессивна. Bst ДНК полимераза катализирует синтез ДНК в направлении 5’-3’. Фермент не обладает 5'-3' и 3'-5' экзонуклеазной активностью, но обладает 5'-3' вытесняющей активностью. Bst ДНК-полимераза очищена из штамма E.coli, содержащего плазмиду с клонированным полноразмерным геном большого фрагмента ДНК-полимеразы I Bacillus stearothermophilus. Фермент содержит бактериальную ДНК.Одна единица активности - количество фермента, необходимое для включения 10 нмолей dNTP в кислотонерастворимую фракцию ДНК за 30 мин при 65oС, рН 8,8.
Контроль качества. Каждая партия фермента тестируется на отсутствие эндонуклеазной и неспецифической экзонуклеазной активности, чувствительность фермента.
Свойства реакционной смеси
Типичный протокол LAMP:
|
Компонент |
Финальная концентрация |
|
10X Буфер для Bst |
1X (не содержит MgSO4) |
|
MgSO4 (100 mM) |
8 mM |
|
dNTP Mix (10 mM) |
1.4 mM каждого |
|
FIP/BIP Primers (10X) |
1.6 µM |
|
F3/B3 Primers (10X) |
0.2 µM |
|
LoopF/B Primers (10X) |
0.8 µM |
|
Bst ДНК полимераза (16,000 U/ml) |
80-320 U/ml |
|
Образец ДНК |
> 10 копий на реакцию |
|
Вода, свободная от нуклеаз |
до 25 µl |
|
Общий объем реакционной смеси |
25 µl |